LAMPLoop-mediated isothermal amplification
LAMP방법은 단순하고 빠른 등온증폭방법으로 strand displacement DNA synthesis 기능을 가지는 Bst DNA polymerase를 이용,
두 쌍의 특이적 primer를 이용하여 loop를 형성한 후 계속적으로 증폭시키는 방법입니다.
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Fig.1
Target DNA의 염기서열에 맞는 LAMP primer 제작
각각의 primer site 에 forward 5’- (F3, F2, F1, B1c, B2c, B3c) -3`,
Revers 3`- (F3c, F2c, F1c, B1, B2, B3)-5` 으로 명칭
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Fig.2
Target DNA에 염기서열에 맞는 primer design
[forward outer primer F3, forward inner primer FIP(F1c + F2),
Backward outer primer B3, Backward inner primer BIP(B1c, B2)] -
Fig.3
Target DNA에 FIP primer 결합 후,
DNA amplification
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Fig.5
F3 primer 결합에 의한 DNA amplification 으로
기존 FIP에 의한 amplification DNA 가닥이
Double-Strand DNA에서 Single-strand DNA 분리 - Fig.4
FIP primer에 의한 DNA amplification 후,
F3 primer 결합, DNA amplification
- Fig.6
F3 primer 결합에 의해 분리된 Single-strand DNA에
BIP primer 결합 후, DNA amplification.
Double-Strand DNA 형성 - Fig.7
형성된 Double-Strand DNA에
B3 primer 결합
- Fig.9
Target DNA 염기서열 Revers 3`- (F3c, F2c, F1c, B1, B2, B3)-5` 에서
최종적으로 3`- F1, F2c, F1C B1, B2, B1c -5` 염기서열을 가진 DNA가
만들어지며, 이때 염기서열 F1과 상보적인 F1c, B1과 상보적인 B1c가
결합함으로써 Loop 형태의 DNA가 형성 - Fig.8
B3 primer 결합에 의해
Double-Strand DNA에서 Single-strand DNA 분리
이후, Design 된 primer F3, FIP(F1c + F2), B3, BIP(B1c, B2)로
Loop형태의 DNA에 결합함으로써 연속적으로 DNA amplification
